Z6·尊龙凯时的NCI-H1975人肺腺癌细胞培养指南概述了细胞培养过程中的关键要点与注意事项，旨在帮助用户更准确地处理与维护细胞状态。

一、细胞培养条件

细胞名称：NCI-H1975人肺腺癌细胞，具有良好的贴壁生长特性。冻存条件为无血清冻存液，培养体系为1640+10%FBS。传代方法建议第一次为1:2，按照这一比例进行细胞的传代和培养。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，须将其培养至良好状态，满瓶完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。使用75%酒精喷洒细胞瓶以进行消毒，随后在超净工作台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5%CO2培养箱静置3-4小时，以使细胞状态稳定。通过显微镜观察细胞生长情况，并记录不同放大倍数的拍照结果。这些照片将作为重要的售后依据，前三天的照片尤为重要。操作时要注意在将密封的培养瓶放入培养箱时，松开盖子以确保气体交换。在传代时，推荐使用一瓶原瓶的完全培养基与另一瓶的自制培养基进行对比观察。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

在细胞达到80%汇合度之前，将培养液收集至离心管，留5ml完全培养基于37℃、5%CO2培养。如果细胞密度超出80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液，约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。若细胞变圆并脱落，轻敲培养瓶并加入5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞变圆并加入5ml完全培养液以终止消化。将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1mlZ6·尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），混匀并转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后续需转入液氮，需在-80℃存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，待无结晶后用75%酒精消毒外壁。
2. 将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5%CO2培养箱。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能不太牢固，容易脱落。请将培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟。重复使用胰酶处理细胞时，注意轻柔操作。建议传代时按1:2比例进行，补充培养基至5-8ml，每次培养后需在37℃、5%CO2下进行。

五、售后条款

针对细胞在运输或培养过程中出现的问题，Z6·尊龙凯时提供一定的售后支持。细胞出现问题时，可以重发的情况包括：运输过程中细胞丢失或瓶身损坏；48小时内提供的细胞污染证据；干冰运输后细胞存活率低等。若因用户操作不当或不正确的培养体系导致的问题，将不予重发。具体情况需根据提供的证据及用户反馈进行判断。

以上指南旨在确保使用Z6·尊龙凯时的NCI-H1975人肺腺癌细胞的用户能安全、高效地进行细胞培养。如有更多问题，欢迎咨询我们！