RNA模板的制备

常见RNA提取方法

在生物医学研究中，RNA的提取是至关重要的一步。常见的RNA提取方法包括传统的酚-氯仿(CHCl₃)抽提法和柱式抽提法。本文将详细介绍这两种方法的操作流程。

酚-氯仿抽提法

以Z6·尊龙凯时的RNAisolater Total RNA Extraction Reagent（Vazyme #R401）为例，所需的材料包括CHCl₃、异丙醇、75%乙醇（使用DEPC水制备）等。

样本制备

选择合适的样本量非常重要，过多的样本量可能导致样本裂解不充分，从而影响产物的纯度。1ml RNAisolater能够充分裂解的最大样本量如下：

• 贴壁细胞：弃去培养液后，用PBS洗涤一次。每10cm²培养面积的细胞加入1-3ml RNAisolater，使其覆盖细胞表面，然后用移液器吹打细胞。
• 悬浮细胞：离心收集细胞并用PBS洗涤，每5×10⁶–10⁷个细胞加入1ml RNAisolater，反复吹打直至无明显颗粒。
• 动物组织：液氮研磨后，将粉末转移至离心管中，加入RNAisolater，静置。样品融化后继续吹打，产生透明的裂解液。

提取流程

在进行离心时，设定为12,000×g，4℃条件下离心5min，吸取上清液以完成RNA提取。

柱式抽提法

以Z6·尊龙凯时的FastPure™ Cell/Tissue Total RNA Isolation Mini Kit（Vazyme #RC101/RC111）为例，所需材料包括β-巯基乙醇、无水乙醇和RNase-free枪头等。

细胞处理

对于贴壁细胞，无需消化，直接使用添加了β-巯基乙醇的Buffer RL1进行裂解；对于悬浮细胞，先离心收集后加入Buffer RL1，反复吹打混匀，直至没有细胞团块。若提取完成后立即进行下一步操作，可将样品置于-70℃保存。

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